Câu 5: Trình bày đ.đ, t/c, và h/động x/tác của E. nối ligase và E. phiên mã ngược Reverse transcriptase.

1.     Enzyme nối Ligase:

       Enzyme Ligase là 1 E nối quan trọng trong TB vì chức năng của nó là sửa chữa các mối liên kết Phosphodiester bị đứt gãy 1 cách ngẫu nhiên hoặc do hậu quả của việc sao chép hoặc tái tổ hợp ADN. Trong kt ADN tai tổ hợp nó đc sd để hàn gắn những chỗ gián đoạn trong chuỗi đường-phosphat, những gián đoạn này thường diễn ra khi ADN TTH đc hình thành bằng cách nối các p/tử ADN từ các nguồn khác nhau. Vì vậy nó đc coi là chất keo p/tử đc sd để kết dính các mẫu ADN với nhau. Chức năng này hết sức quan trọng ĐV sự thành công của nhiều thí nghiệm, và vì vậy, ADN ligase là E nối chủ chốt trong kt ADN Tái tổ hợp.

     Các loại E nối thường dùng trong kt DT:

-         Enzyme E.coli ADN ligase đc tách chiết từ VK E.coli, xúc tác p/ứng nối 2 đoạn trình tự ADN có đầu sole.

-         E T4 ADN ligase là E đc tách chiết từ Phage T4 xâm nhiễm E.coli có c/năng giống như E.co ADN ligase nhưng lại có k/năng nối 2 đoạn trình tự ADN có đầu bằng. Do đó nó là E nối đc ưa chuộng nhất h/nay.

-         E T4 ADN ligase tách chiết từ Phage T4­ xâm nhiễm E.coli có k/năng nối 2 trình tự ADN bằng các liên kết phosphodiester...

2.     E. phiên mã ngược Reverse transcriptase.

E. phiên mã ngược có k/năng tổng hợp nên ADN 1 mạch đg.là c-ADN (complementary ADN) từ khuôn mARN hoặc từ 1 đoạn polyribonucletide tổng hợp hóa học. Nhờ Enzyme Reverse transcriptase này các nhà n/cứu có thể tổng hợp đc hầu như bất cứ gen riêng biệt nào miễn có mặt mARN của gen đó. Các c-ADN mạch đơn có thể đc biến thành mạch kép nhờ ADN polymerase và đg.là c-ADN kép (c-ADN duplex). Đoạn c-ADN kép đc gắn vào plasmid và biến nạp vào VK để tạo dòng c-ADN.